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Ciencia

Curso de Posgrado: Citometría de flujo: generalidades y su aplicación en Medicina Veterinaria

06/08/2018 08:00 | ICIVET LITORAL

Está destinado a estudiantes de posgrado (Doctorado y Maestría), becarios posdoctorales y profesionales Veterinarios, Biólogos Bioquímicos, Farmacéuticos, Biotecnólogos, Médicos y carreras afines.

UNIDAD EJECUTORA
Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICIVET-LITORAL), UNL-CONICET, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral.

ÁREA DE CONOCIMIENTO
Ciencias Veterinarias, Ciencias de la Salud, Inmunología, Microbiología, Bioquímica, Ciencia y Tecnología

PERSONAS A LAS QUE ESTÁ ORIENTADO
Estudiantes de posgrado (Doctorado y Maestría), becarios posdoctorales y profesionales Veterinarios, Biólogos Bioquímicos, Farmacéuticos, Biotecnólogos, Médicos y carreras afines.

OBJETIVOS
La Citometría de Flujo es una técnica que permite la medición simultánea de múltiples características en una célula, la cual es ampliamente utilizada en la investigación, diagnóstico y en la clínica, en diferentes áreas tales como Inmunología, Microbiología, Reproducción, Biología Molecular, Genética, Hematología, Oncología y Farmacología. Los objetivos del presente curso son:
- Difundir la investigación y el uso de técnicas de última generación.
- Contribuir a la formación de los alumnos, brindando conocimiento básico sobre los fundamentos teóricos y los procedimientos prácticos de las distintas técnicas de inmunomarcación aplicadas a la citometría de flujo.
Se espera lograr una formación adecuada en los conceptos básicos de funcionamiento de los equipos de citometría de flujo así como también en conceptos básicos y aplicaciones prácticas de la Citometría de flujo empleados en el estudio de distintos sistemas biológicos.
A su vez, se propone desarrollar actividades prácticas relacionadas con los contenidos teóricos para afianzar el conocimiento de los mismos y adquirir habilidades en la ejecución de las mismas. Por último, se desarrollará un taller de procesamiento de datos donde cada alumno tendrá su computadora y podrá capacitarse en el uso de programas de análisis.

LUGAR EN DONDE SE LLEVARÁ A CABO
Laboratorio de Biología Celular y Molecular Aplicada, Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICIVET-Litoral), Facultad de Ciencias Veterinarias, UNL.

DURACIÓN
El curso tendrá una duración de 40 horas distribuidas de la siguiente manera:
Clases Teóricas: 20 h
Clases Prácticas en laboratorio: 20 h

INSCRIPCION Y COSTOS
Fecha de realización: 6 al 10 de Agosto de 2018. Inscripciones: hasta el 27 de Julio de 2018. Enviar CV y carta de intención a: citometria2018@fcv.unl.edu.ar . Se dispone de un número limitado de becas para gastos de traslado, inscripción y viáticos.
Costo inscripción: $ 2000 (Teoría y Práctica). Se entregarán Becas.

CRONOGRAMA DE LAS ACTIVIDADES DEL CURSO
El curso se desarrollará mediante clases teórico-prácticas en las que se discutirán distintos aspectos de las técnicas de inmunomarcación para citometría de flujo. Además, mediante el desarrollo de las actividades prácticas, el alumno se entrenará en la inmunofenotipicaficación de subpoblaciones linfocitarias en especies de interés veterinario, como así también análisis del ciclo, la muerte y la proliferación celular. Se realizará también, ejercitación que le permitirá familiarizarse con el manejo de softwares empleados para el análisis de datos.

Lunes (9-13 hs)
• Introducción a la Citometría de Flujo. Generalidades de la Citometría de Flujo, fundamentos, descripción, calibración del equipo e introducción al análisis de datos. Docente: Carina Porporatto
• Principios de la fluorescencia, fluorocromos disponibles simples y tándem.
Docente: María Sol Renna
• Protocolos y diseño de experimental: Obtención y tratamiento de la muestra. Marcaciones de superficie e intracelular. Marcación directa e indirecta. Controles necesarios y titulación de anticuerpos.
Docentes: María Sol Renna y Bibiana Dallard

Lunes (14- 18 hs.)
• Protocolo a desarrollar en la primera actividad práctica. Carina Porporatto

Actividad Práctica: Obtención de células murinas y bovinas

1- Obtención de células de diferentes órganos mediante dos metodologías: Gradiente de densidad (Ficoll-Hipaque) y buffer de lisis.
2- Marcación de células con un colorante vital (ioduro de propidio) para diferenciar células vivas de muertas.
3- Adquisición en el citómetro de flujo evaluando las diferentes estrategias de gating y comparando las diferentes poblaciones que se obtienen mediante las dos metodologías utilizadas.

Docentes: Gerardo Gatti, Celina Baravalle, Eugenia Baravalle, Fernanda Rodríguez, Belkis Marelli, Bibiana Dallard

Martes (9-13 hs)
• Aplicaciones de la citometría de flujo en la clínica veterinaria: inmunofenotipo en oncología veterinaria, viabilidad espermática, funcionalidad celular, análisis de DNA y RNA. Fundamentos y aplicaciones de la separación celular (Sorting). Evaluación de eficiencia de transfección.
Docente: Carina Porporatto
• Utilidad de las microesferas en citometría de Flujo: detección de citoquinas y proteínas, cuantificación de diferentes citoquinas solubles mediante ensayos de multiplexado. Phosflow.
Docente: María Sol Renna
• Protocolo a desarrollar en la segunda actividad práctica: Marcación de superficie. Docente: Gerardo Gatti


Martes (14-18 hs)
Actividad Práctica: Marcación de superficie
1- Obtención de células de sangre bovina y buffer de lisis.
2- Marcación de superficie (doble o triple marca).
3- Adquisición en el citómetro de flujo.
Docentes: María Sol Renna, Carina Porporatto, Gerardo Gatti, Fernanda Rodríguez, Melisa Velázquez y Ayelén Amweg
Miércoles 9-13 hs.
• Utilización de la citometría de flujo para el estudio de muerte celular por apoptosis: marcación con Anexina V, en combinación de diferentes fluorocromos. Docente: Luciana Bohl
• Evaluación de estrés oxidativo: determinación de ROS en células eucariotas y procariotas. Docentes: Luciana Bohl, María Sol Renna
• Evaluación de ciclo celular por Citometria de flujo. Docente: Gerardo Gatti

Miércoles 14-18 hs
• Protocolo de Marcación con Anexina V y colorantes específicos de ADN (Ioduro de propidio/7AAD). Docente: Luciana Bohl
• Actividad Práctica: Detección de Apoptosis
1- Marcación de células, previamente estimuladas, con Anexina V/ioduro de propidio.
2- Adquisición de células en el citómetro de flujo.
Docentes: Luciana Bohl, Carina Porporatto, Maria Sol Renna y Gerardo Gatti

Jueves 9-13 hs
• Aplicación de la citometría en microbiología: Análisis de viabilidad bacteriana, susceptibilidad a antimicrobianos. Protocolo para la determinación de viabilidad bacteriana. Docentes: Laura Breser y Carina Porporatto
• Rompiendo barreras mediante citometría con enfoque acústico y aplicaciones destacadas. Nuevos desarrollos tecnológicos y experimentales en citometría de flujo. Buenas prácticas en Citometría de flujo. Docentes: Augusto Sorrequieta (Thermo Fisher Scientific)
• Determinación de la proliferación de celular de linfocitos: marcación con CFSE o colorantes similares (sistemas in vivo e in vitro). Docente: María Laura Breser

Jueves 14-18 hs.
• Actividad Práctica: Determinación de la proliferación celular. Recolección de células cultivadas con estímulos mitogénicos y teñidas con CFSE. Adquisición de células en el citómetro de flujo. Docentes: María Laura Breser, Carina Porporatto, María Sol Renna, Gerardo Gatti, Melisa Velázquez.

Viernes 9- 13 hs
• Introducción al uso de programas de adquisición y análisis de datos de citometría de flujo: FlowJo, CellQuest y otros. Análisis de datos y estrategias de gating. Análisis de resultados. Ejercitación con el programa FlowJo para el análisis de datos: cálculo de valores absolutos de poblaciones celulares, determinación de apoptosis y la proliferación celular. (Aula informática). Docentes: María Sol Renna, Carina Porporatto y Gerardo Gatti

Viernes 14-18 hs
• Discusión de resultados. Evaluación. Docentes: María Sol Renna, Carina Porporatto, Gerardo Gatti, Bibiana Dallard, Celina Baravalle.

INSCRIPCION Y COSTOS
Fecha de realización: 6 al 10 de Agosto de 2018. Inscripciones: hasta el 27 de Julio de 2018.

Enviar CV y carta de intención a: citometria2018@fcv.unl.edu.ar . Se dispone de un número limitado de becas para gastos de traslado, inscripción y viáticos.


Costo inscripción: 00 (Teoría y Práctica). Se entregarán Becas.


DOCENTES:
Dra. RENNA, María Sol
Dra. PORPORATTO, Carina
Dra. BRESER, María Laura
Dra. BOHL, Luciana Paola
Dr. GATTI, Gerardo
Dra. DALLARD Bibiana
Dra. BARAVALLE, Celina
Dra. BARAVALLE, María Eugenia
Dra. RODRIGUEZ, María Fernanda
Dra. VELAZQUEZ, Melisa
Dra. MARELLI, Belkis
Dra. AMWEG, Ayelen

COLABORADORES:
Dra. PEREYRA Elizabet.
Lic. SILVESTRINI Paula.
Med. Vet. BECCARIA Camila.
Med. Vet. SACCO Sofía Clara.
Lic. PERALTA María Belén.

 

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