Tema: Producción de nitrito reductasa recombinante y sus mediadores fisiológicos. Aplicación en la construcción de biosensores para nitrito.

Director: Dr. Felix M. Ferroni (e-mail: fferroni@fbcb.unl.edu.ar) (Investigador Asistente, CONICET; JTP simple, Departamento de Física, FBCB-UNL).

Asistente: Dra. Silvia Raquel Hernández (e-mail: shernand@fbcb.unl.edu.ar) (Profesora Adjunta y Directora del Laboratorio de Sensores y Biosensores; Cátedra de Química Analítica I, FBCB-UNL).

Objetivos:
Generales:
- Desarrollar una metodología de trabajo que le permita al capacitando colaborar en los proyectos de investigación en ejecución, focalizados en la obtención de macromoléculas funcionales y en la aplicación al desarrollo de biosensores.
- Estimular el aprendizaje relacionado a la búsqueda de bibliografía científica y al análisis crítico de trabajos originales de investigación en el marco de este plan de formación extracurricular.
- Fomentar el aprendizaje de un trabajo sistemático para la obtención de datos y la interpretación de resultados originales, y ulteriormente para la documentación de sus resultados en forma rigurosa.
Particulares:
- Ejecutar la expresión heteróloga de los genes que codifican para los mediadores fisiológicos y nitrito reductasas de cobre en Escherichia coli.
- Seguir procedimientos cromatográficos FPLC (intercambio iónico y tamiz molecular) para la purificación de los sistemas recombinantes.
- Estudiar electroquímicamente los componentes bioactivos, luego de su adsorción sobre electrodos a base de grafito o luego de su incorporación en la constitución de la matriz de la superficie electródica.
- Evaluar la funcionalidad de los electrodos bio-modificados, optimizando simultáneamente las condiciones fisicoquímicas para lograr su funcionalidad óptima frente a la determinación del analito (nitrito).

Requerimientos:
Bioquímica básica de macromoléculas (excluyente), Química Analítica I y Química Analítica II.

Plan de Trabajo:
El trabajo se centrará en la producción de proteínas recombinantes relevantes para el biosensado de nitrito (mediadores fisiológicos y nitrito reductasas de cobre), mediante la expresión heteróloga en E. coli de los genes codificantes seleccionados. Fundamentalmente en la obtención de nitrito reductasas derivadas de bacterias del suelo y extremófilos que habitan en las profundidades de la corteza terrestre y sus mediadores fisiológicos.
Posteriormente se procederá con la caracterización preliminar de las propiedades biofisicoquímicas y electroquímicas de los sistemas recombinantes obtenidos. El manejo de la obtención de los sistemas recombinantes y la caracterización bioquímica se realizará bajo la tutela del Dr. Felix M. Ferroni (e-mail: fferroni@fbcb.unl.edu.ar).
Las proteínas recombinantes obtenidas y caracterizadas serán incorporadas a transductores electroquímicos, siguiendo distintos protocolos de inmovilización, para la generación de biosensores. Estos biosensores serán estudiados en distintos medios, y bajo distintas técnicas electroquímicas, para caracterizar su funcionamiento, y así lograr el mejor rendimiento analítico en la determinación de nitrito. Esta instancia, se realizará bajo la tutoría de la Dra. Silvia R. Hernández (e-mail: shernand@fbcb.unl.edu.ar).
Los sistemas serán estudiados en profundidad en el marco de futuros trabajos que deriven en el desarrollo de Tesinas de Licenciatura. Se valorará candidatos que presenten afinidad con la investigación académica.

Convocatoria: del 15 de abril al 15 de mayo de 2019

Comunicarse y enviar postulaciones a:
fferroni@fbcb.unl.edu.ar
shernand@fbcb.unl.edu.ar