Inscripciones abiertas del 1 de marzo al 30 de abril.
Título: Producción y caracterización de metaloenzimas con dominio cupredoxina.
Director: Dr. Felix M. Ferroni.
Asistente: Lic. Cintia S. Ramírez.
Dirigido a estudiantes de la Licenciatura en Biotecnología.
Tema de la actividad:
El trabajo se centrará en la producción de proteínas recombinantes relevantes para el biosensado de nitrito (TsNirK, BjNirK, sus variantes y/o formas truncas) y de contaminantes ambientales (TsLAC50K) mediante la expresión heteróloga de los genes insertados en plásmidos adecuados en Escherichia coli. Se optimizarán las condiciones de inducción de la expresión de los construcciones plasmídicas, mediante el manejo de diferentes medios de cultivo (LB, TY, medio de autoinducción y medio mínimo M9), diferentes cepas de E. coli, inductores (IPTG, Lactosa) y adición de metales.
Una vez optimizadas las condiciones de expresión se procederá con la optimización de la purificación. Para ello se diseñarán protocolos de precipitación con sulfato de amonio para subfraccionamiento, intercabio iónico (aniónico o catiónico según corresponda) y pulido final en tamiz molecular (Superdex 75, Superdex 200).
Posteriormente se procederá con la caracterización preliminar de las propiedades biofisicoquímicas y electroquímicas de los sistemas recombinantes obtenidos. Las muestras se someterán a análisis de composición cofactores metálicos, contenido proteico, espectrofotometría UV-Vis, Resonancia Paramagnética Electrónica (EPR) y voltametría cíclica en electrodos de oro.
De acuerdo a estas actividades, se persigue que la formación extracurricular propuesta tenga un carácter multidisciplinario, constituyendo una tendencia en el desarrollo innovativo de herramientas biotecnologías. El alumno asistirá a becarios doctorales que desempeñan actividades en el grupo. El capacitando desarrollará espíritu crítico, nociones prácticas y toma de decisiones en lo que conlleva el proceso de producción de una metaloenzima recombinante, desde la optimización de las condiciones de expresión hasta los procesos de purificación de la metaloenzima. El alumno adquirirá conocimientos prácticos en el análisis de composición de cofactores metálicos, evaluación de la actividad, propiedades espectroscópicas UV-Vis, EPR y metodología electroquímicas durante la caracterización de los sistemas recombinantes obtenidos.
Por lo tanto, los sistemas desarrollados serán estudiados en profundidad en el marco de futuros trabajos que deriven en el desarrollo de Tesinas de Licenciatura. Se valorará candidatos que presenten afinidad con la investigación académica.
Requisitos: tener aprobadas las asignaturas Física I y II, Química Analítica I y II. Biofisicoquímica de Metaloproteínas (No excluyente).
Lugar donde se llevará a cabo: Departamento de Física (FBCB-UNL).
Duración de la actividad: 12 meses.
Documentación solicitada: CV y certificado analítico con/sin aplazos.
Inscripciones abiertas del 1 de marzo al 30 de abril.
Fecha y lugar de la entrevista: 2 de mayo en el Departamento de Física (FBCB-UNL).
Contacto y correo electrónico institucional para el envío de la documentación o dudas:
fferroni@fbcb.unl.edu.ar